[桂花树]液相色谱 - 质谱法测定苦瓜木中黄曲霉毒
基质效应是影响LC / MS定量准确性的重要因素，在方法学评价阶段至关重要。这项研究中，使用了稀释法和通过优化色谱和光谱测定条件质量，苦桂花树的基体效应克服与分析的全过程干涉，并建立了大量用于黄曲霉毒素B1，B2，G1，G2黄曲霉毒素污染的筛子。
比纯化塔Mycosep226的纯化方法中，液体物料与检测相结合的方法具有以下特征：高回收率，经济，简单：样品的11个批次的检测显示，该试验结果黄曲霉毒素在2手上呈阳性。染的由黄曲霉毒素B1的水平是1590×2.340微克·KG1和污染的由总黄曲霉毒素（B1 B2 G1 G2）的电平是2.340×3.304微克·KG1，表明苦杏仁污染黄曲霉毒素。须认真对待这一现象，有必要检查其储存方法，以减少黄曲霉毒素污染。相色谱 - 质谱法，中国传统汤剂件，苦木琼脂，黄曲霉毒素，所述mytoxines（黄曲霉毒素，缩写为AF）是由黄曲霉，黑曲霉产生的有毒次级代谢产物寄生等，包括含有黄曲霉毒素B1（AFB1），B2（AFB2），G1（AFG1），G2（AFG2）有严重的致癌性，致畸，致突变等，损害是énormes.L AFB1于1993年被世界卫生组织癌症研究所（IARC）指定为I类致癌物[1-2]。这方面，2010年版“中国药典”中包含用于AFB1，AFB2，AFG1，AFG2液相色谱高性能荧光检测方法，在五年中国中药材，如钓鱼核心和海洋脂肪[3]，AFB1的最大限量为5μg·kg1。AF（B1 B2 G1 G2）的最大限制是10微克·千克1，桂花树但没有相关的限制标准其他相关植物如木材苦琼脂模具。杏仁是干燥的种子和成熟杏，杏西伯利亚，东北杏或杏蔷薇科，其具有减少的气的效果，缓解咳嗽，减轻哮喘和缓解泻药[4]。桃仁类似，苦杏仁含有丰富的淀粉，油和其他成分。
于在储存和加工过程中操作不当，很容易造成霉菌，从而污染了霉菌毒素。在今年的研究小组发现，木苦和琼脂受到霉菌和黄曲霉毒素B1污染的可能性比其他中国中药材高得多[5 -6。此，为了保护患者的健康和促进木材苦琼脂中国药典标准的限制，有必要继续对黄曲霉毒素的污染研究。LC-MS / MS具有高选择性，高灵敏度和几个composants.Elle的同时检测等优点，近年来已广泛应用于研究真菌毒素和已成功检测中药中的霉菌毒素。请前景[7-9]。于中国传统医学的成分复杂，基体效应已成为影响检测的LC-MS /MS.À目前，通过LC-MS检测霉菌毒素的精度的主要因素中药材中的MS / MS专注于使用免疫亲和柱或多功能纯化。法用于样品纯化，但纯化效果很容易受样品基质，pH，溶剂，盐浓度等因素的影响。多纯化柱昂贵且不能重复使用。测成本很高[10]，不能满足大量要求。要检测药用物质。研究的目的是使用稀释的方法和优化色谱和光谱测定条件质量降低的基体效应的影响，并建立一组AFB1的，B2，G1可能被污染没有复杂和昂贵的纯化步骤的苦杏仁。
LC-MS / MS法的G2定性和定量检测的同时实现其经济的筛选，快捷，高速，提供参考，进一步加强中国传统医学的安全性评价。备TSQ量子访问谱仪串联四极四极型质量与的Xcalibur 2.0操作软件（热，USA），氮鼓风机（INT，USA），表冷冻离心机器（Sartorius，Germany）中，涡随着VX8 VXR配件（德国， IKA），pH计（美国，Thermo），电子分析天平为1：10，000（Sartorius，德国）。1.039毫克混合黄曲霉毒素参考AFB1溶液·L-1，0 AFB2 0.314毫克·L-1，AFG1 1.056毫克·L-1，0 AFG2 0.288毫克·L-1（批号LB96951），从美国购买国。SUPELCO公司。醇，乙腈（色谱纯，德国，默克），乙酸铵，甲酸（色谱纯，USA，DikmaPure），用于Mycosep226真菌毒素（卢氏，USA），超纯水在使用通用的纯化塔由Millipore Q纯水净化设施（法国制造，Millipore）进行的实验。100克苦和琼脂木材样品的样品在药店购买了，市场对药品在广州的医院和Ruoting战，在科学中心的研究人员证明为真实的广州中医药大学中医药资源技术。存在干燥的窑中以备后用。法色谱条件柱为Hypersil GOLD C18柱（2.1 mm x 100 mm，3μm）（Thermo，USA）;水相A：甲醇，B-4.0mmol·L-1的0.1％甲酸醋酸盐（pH 3.0）梯度洗脱水溶液（0至5分钟，20％A，5 20分钟，20％至80％A）。速为0.3mL.min1，柱温为30℃，样品温度为4℃，注射体积为10μL。
1.如在该图中，AFG2保留时间，G1可以看出，B1和B2分别为14.23，15.11，15.91和16.62分钟，阴性样品对照无干扰在每种化合物的室温下。线性关系进行了研究用于黄曲霉毒素参考溶液，将其用25稀释，50，125，250，1250，2500，12 500，通过色谱法25 000和125 000倍，用甲醇和分析通过上述色谱和质谱条件。标（X），峰面积为纵坐标（Y），权重W = 1 / X 2和线性方程，通过使用的Xcalibur 2.0计算。果显示在表2中。以看出，四种黄曲霉毒素在各自的浓度范围内具有良好的线性关系。测（LOD）和定量限（LOQ）将稀释的梯度的参考溶液的极限注入LC / MS根据分析光谱上述色谱质谱，和四种类型的S / N比的测定，以3/1和10/1。LOD和黄曲霉毒素的LOQ被示于表2日内和-昼夜精密度试验平行苦琼脂木粉的3份（未被污染），2进行的，每份0g。照2.3的方法制备试验溶液，加入特定浓度的参比溶液，制备低，中，高浓度。
个层次的浓缩溶液的浓度（AFB1，B2，G1，G2中的浓度为0.416，0.126，0.422，0.115，4.16，1.26，4.22，1.15，12.48，3 ，78，12.66，3.45μg·L-1）。个浓度由3个部分组成，并重复测量2次3 jours.Lanalyse方差基于峰面积的结果进行，而日内准确度和精密度的昼夜每个样品计算方法。果表明，三个层次的黄曲霉毒素的RSD帧内强度为1.6％至6.8％和昼夜精度为2.3％至6.6％，这表明精度仪器很好。并行重现性试验用9份木粉苦琼脂（未受污染），每份，取决于低浓度，中和高（具体AFB1浓度，B2，G1上2.0克，G2兼容3 4个单位，相当于生药浓度的质量是8.320，2.520，8.440，2.300，83.20，25.20，84.40，23.00，249.6，75.60，253.2，69.00微克·千克1）添加的黄曲霉毒素标准溶液蒸发溶剂后，按2.3的方法制备。于测试溶液，进样分析，根据每个浓度峰面积的方差分析，计算方法的重复性。果列于表4中可以看出，可再现RSD 4对黄曲霉毒素的2.2％3个浓度水平为8.6％，这表明该方法是可重复的。体效应：掺杂低，中，根据3.4的方法制备的高浓度的三种溶液中使用，并且每个标准溶液的三种浓度的通过色谱.The对照品溶液相同浓度的每种制备制备浓度和每个样品进行分析。组的峰面积之间的比率通过下式[11]和苦桂花树的基体效应计算了检查，在表3所示的结果，表明该效果基质效应可以忽略不计。
溶液中，3份各浓度，注射分析，以峰面积记为B.然后用色谱甲醇中，制备标准溶液的浓度相同，3份各浓度，分析从注入开始，峰面积记为C;等式[11]计算RE提取后的回收率和绝对回收率RA。果如表4所示.RE = A / B×100％; RA = A / C×100％的方法，比较12份平行木粉苦琼脂（未被污染），每个2.0克，其中3被用作空白对照和低于3其他9 5。
备后，在绘制一个玻璃试管的上清液6 mL和纯化它放在一个Mycosep226柱[7]（参考产品制造商的说明用于特定操作），然后取250微升洗脱液和用氮气干燥，得到低体积，平均浓度为3的溶液，各浓度为3份;根据2.3的方法采取的苦琼脂（未被污染）还3份木粉，2.0克每个部分，取6.0毫升的上清液到玻璃试管中，纯化柱Mycosep226（参见制造商的具体操作说明），然后取250μL洗脱液并用氮气吹干。据3.4中描述的方法，制备低浓度，中浓度和高浓度的三种浓缩溶液，每种浓度各含3份;然后用色谱法甲醇制备相同浓度的标准溶液，每个浓度为3份;注射分析，计算出三组样品的峰面积，根据式3.7和3.7的结果计算的方法的ER和AR进行比较和用于这两种方法之间的差异进行分析。果列于表4中可以看出，回收率不纯化> Mycosep226回收率纯化，表明本研究建立的方法具有较高的回收率和一个降低损失率。11个大量木材样品在药店收集苦琼脂，药物在市场上的样品的样品和在广州医院判定结果，每个含2.0g根据制备和分析上述方法。论的基体效应是由于在目标化合物的电离效率样品顺流分量的影响，并且是主要影响因素导致LC-MS / MS定量的不精确性[12]。此，基质效应的评估在该方法的验证阶段尤为重要。主要方法是降低基体效应[12]：优化样品前处理技术，例如不同的纯化柱，稀释样品的纯化，减少干扰组分的浓度，优化溶剂提取，定容溶剂，提高质谱对目标的响应，改善色谱分离，降低并流成分的影响等方法。而，中国报道的中草药中霉菌毒素的LC-MS / MS检测主要集中在样品预处理技术上，即样品通过柱d纯化免疫亲和或多功能纯化柱。检测成本严重限制了LC-MS / MS方法的广泛应用。
此，基于降低基体效应的上述方法中，不同的流动相进行比较，并通过稀释法（0.1％甲酸水溶液的甲醇溶液进行了优化， 4.0mmol·L-1的0.1％甲酸水溶液和甲醇，4.0mmol）。酸铵·L-1 - 0.2％甲酸和甲醇），梯度洗脱，在恒定的体积（流动相，甲醇）等条件下，溶剂水溶液从而增加了响应黄曲霉毒素。后，被用来研究在低浓度，中和élevées.Les矩阵木苦琼脂的效果的实验结果表明，采矿后账单[11]的方法，这项研究的方法克服了LC-MS / MS整体的基质效应和定量分析。过程的影响可用于快速准确地检测苦瓜木材中的AFB1，B2，G1，G2。时，比较该方法与纯化塔Mycosep226的效果，人们发现，AR的速率和ER两者方法是显著不同：纯化后的各黄曲霉毒素的回收率Mycosep226纯化柱减少到一定程度，表明纯化柱纯化。方法导致目标化合物的损失，这对痕量残留黄曲霉毒素的检测极为不利。方法具有上述缺点和提取和检测过程是简单的，这不仅降低了成本检测，而且还提高了结果的精度，并且可以被用于木材的大规模筛查苦瓜。集三种类型苦菜和agariques的在该实验：苦木琼脂（直到外皮），桂花树油炸苦（种皮），木苦琼脂（未接种的），测试结果表明，3个部分的皮肤无核两种污染黄曲霉毒素和其他桂花树苦了未接种不被污染，这或许可以解释的营养成分（油，淀粉种子仁在苦杏仁后完全暴露，对真菌更敏感。染，从而增加黄曲霉毒素污染的风险。此，我们必须认真对待污染现象桂花树苦黄曲霉素，这是需要研究的方法和适当的贮存条件，以减少污染的风险，同时迅速建立标准适当限制有助于减少黄曲霉毒素。消费者来说太糟糕了。项研究提供了快速检测中国中药材中黄曲霉毒素的一个新的研究思路：通过降低基质成分的浓度，优化色谱条件与质谱和减少CO洗脱破坏性成分，有可能摆脱LC-MS / MS的中草药基质。以在不需要昂贵的纯化柱的情况下实现测试的影响，以允许筛选和测试药物。
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桂花树 http://wap.baolincx.com
比纯化塔Mycosep226的纯化方法中，液体物料与检测相结合的方法具有以下特征：高回收率，经济，简单：样品的11个批次的检测显示，该试验结果黄曲霉毒素在2手上呈阳性。染的由黄曲霉毒素B1的水平是1590×2.340微克·KG1和污染的由总黄曲霉毒素（B1 B2 G1 G2）的电平是2.340×3.304微克·KG1，表明苦杏仁污染黄曲霉毒素。须认真对待这一现象，有必要检查其储存方法，以减少黄曲霉毒素污染。相色谱 - 质谱法，中国传统汤剂件，苦木琼脂，黄曲霉毒素，所述mytoxines（黄曲霉毒素，缩写为AF）是由黄曲霉，黑曲霉产生的有毒次级代谢产物寄生等，包括含有黄曲霉毒素B1（AFB1），B2（AFB2），G1（AFG1），G2（AFG2）有严重的致癌性，致畸，致突变等，损害是énormes.L AFB1于1993年被世界卫生组织癌症研究所（IARC）指定为I类致癌物[1-2]。这方面，2010年版“中国药典”中包含用于AFB1，AFB2，AFG1，AFG2液相色谱高性能荧光检测方法，在五年中国中药材，如钓鱼核心和海洋脂肪[3]，AFB1的最大限量为5μg·kg1。AF（B1 B2 G1 G2）的最大限制是10微克·千克1，桂花树但没有相关的限制标准其他相关植物如木材苦琼脂模具。杏仁是干燥的种子和成熟杏，杏西伯利亚，东北杏或杏蔷薇科，其具有减少的气的效果，缓解咳嗽，减轻哮喘和缓解泻药[4]。桃仁类似，苦杏仁含有丰富的淀粉，油和其他成分。
于在储存和加工过程中操作不当，很容易造成霉菌，从而污染了霉菌毒素。在今年的研究小组发现，木苦和琼脂受到霉菌和黄曲霉毒素B1污染的可能性比其他中国中药材高得多[5 -6。此，为了保护患者的健康和促进木材苦琼脂中国药典标准的限制，有必要继续对黄曲霉毒素的污染研究。LC-MS / MS具有高选择性，高灵敏度和几个composants.Elle的同时检测等优点，近年来已广泛应用于研究真菌毒素和已成功检测中药中的霉菌毒素。请前景[7-9]。于中国传统医学的成分复杂，基体效应已成为影响检测的LC-MS /MS.À目前，通过LC-MS检测霉菌毒素的精度的主要因素中药材中的MS / MS专注于使用免疫亲和柱或多功能纯化。法用于样品纯化，但纯化效果很容易受样品基质，pH，溶剂，盐浓度等因素的影响。多纯化柱昂贵且不能重复使用。测成本很高[10]，不能满足大量要求。要检测药用物质。研究的目的是使用稀释的方法和优化色谱和光谱测定条件质量降低的基体效应的影响，并建立一组AFB1的，B2，G1可能被污染没有复杂和昂贵的纯化步骤的苦杏仁。
LC-MS / MS法的G2定性和定量检测的同时实现其经济的筛选，快捷，高速，提供参考，进一步加强中国传统医学的安全性评价。备TSQ量子访问谱仪串联四极四极型质量与的Xcalibur 2.0操作软件（热，USA），氮鼓风机（INT，USA），表冷冻离心机器（Sartorius，Germany）中，涡随着VX8 VXR配件（德国， IKA），pH计（美国，Thermo），电子分析天平为1：10，000（Sartorius，德国）。1.039毫克混合黄曲霉毒素参考AFB1溶液·L-1，0 AFB2 0.314毫克·L-1，AFG1 1.056毫克·L-1，0 AFG2 0.288毫克·L-1（批号LB96951），从美国购买国。SUPELCO公司。醇，乙腈（色谱纯，德国，默克），乙酸铵，甲酸（色谱纯，USA，DikmaPure），用于Mycosep226真菌毒素（卢氏，USA），超纯水在使用通用的纯化塔由Millipore Q纯水净化设施（法国制造，Millipore）进行的实验。100克苦和琼脂木材样品的样品在药店购买了，市场对药品在广州的医院和Ruoting战，在科学中心的研究人员证明为真实的广州中医药大学中医药资源技术。存在干燥的窑中以备后用。法色谱条件柱为Hypersil GOLD C18柱（2.1 mm x 100 mm，3μm）（Thermo，USA）;水相A：甲醇，B-4.0mmol·L-1的0.1％甲酸醋酸盐（pH 3.0）梯度洗脱水溶液（0至5分钟，20％A，5 20分钟，20％至80％A）。速为0.3mL.min1，柱温为30℃，样品温度为4℃，注射体积为10μL。
1.如在该图中，AFG2保留时间，G1可以看出，B1和B2分别为14.23，15.11，15.91和16.62分钟，阴性样品对照无干扰在每种化合物的室温下。线性关系进行了研究用于黄曲霉毒素参考溶液，将其用25稀释，50，125，250，1250，2500，12 500，通过色谱法25 000和125 000倍，用甲醇和分析通过上述色谱和质谱条件。标（X），峰面积为纵坐标（Y），权重W = 1 / X 2和线性方程，通过使用的Xcalibur 2.0计算。果显示在表2中。以看出，四种黄曲霉毒素在各自的浓度范围内具有良好的线性关系。测（LOD）和定量限（LOQ）将稀释的梯度的参考溶液的极限注入LC / MS根据分析光谱上述色谱质谱，和四种类型的S / N比的测定，以3/1和10/1。LOD和黄曲霉毒素的LOQ被示于表2日内和-昼夜精密度试验平行苦琼脂木粉的3份（未被污染），2进行的，每份0g。照2.3的方法制备试验溶液，加入特定浓度的参比溶液，制备低，中，高浓度。
个层次的浓缩溶液的浓度（AFB1，B2，G1，G2中的浓度为0.416，0.126，0.422，0.115，4.16，1.26，4.22，1.15，12.48，3 ，78，12.66，3.45μg·L-1）。个浓度由3个部分组成，并重复测量2次3 jours.Lanalyse方差基于峰面积的结果进行，而日内准确度和精密度的昼夜每个样品计算方法。果表明，三个层次的黄曲霉毒素的RSD帧内强度为1.6％至6.8％和昼夜精度为2.3％至6.6％，这表明精度仪器很好。并行重现性试验用9份木粉苦琼脂（未受污染），每份，取决于低浓度，中和高（具体AFB1浓度，B2，G1上2.0克，G2兼容3 4个单位，相当于生药浓度的质量是8.320，2.520，8.440，2.300，83.20，25.20，84.40，23.00，249.6，75.60，253.2，69.00微克·千克1）添加的黄曲霉毒素标准溶液蒸发溶剂后，按2.3的方法制备。于测试溶液，进样分析，根据每个浓度峰面积的方差分析，计算方法的重复性。果列于表4中可以看出，可再现RSD 4对黄曲霉毒素的2.2％3个浓度水平为8.6％，这表明该方法是可重复的。体效应：掺杂低，中，根据3.4的方法制备的高浓度的三种溶液中使用，并且每个标准溶液的三种浓度的通过色谱.The对照品溶液相同浓度的每种制备制备浓度和每个样品进行分析。组的峰面积之间的比率通过下式[11]和苦桂花树的基体效应计算了检查，在表3所示的结果，表明该效果基质效应可以忽略不计。
溶液中，3份各浓度，注射分析，以峰面积记为B.然后用色谱甲醇中，制备标准溶液的浓度相同，3份各浓度，分析从注入开始，峰面积记为C;等式[11]计算RE提取后的回收率和绝对回收率RA。果如表4所示.RE = A / B×100％; RA = A / C×100％的方法，比较12份平行木粉苦琼脂（未被污染），每个2.0克，其中3被用作空白对照和低于3其他9 5。
备后，在绘制一个玻璃试管的上清液6 mL和纯化它放在一个Mycosep226柱[7]（参考产品制造商的说明用于特定操作），然后取250微升洗脱液和用氮气干燥，得到低体积，平均浓度为3的溶液，各浓度为3份;根据2.3的方法采取的苦琼脂（未被污染）还3份木粉，2.0克每个部分，取6.0毫升的上清液到玻璃试管中，纯化柱Mycosep226（参见制造商的具体操作说明），然后取250μL洗脱液并用氮气吹干。据3.4中描述的方法，制备低浓度，中浓度和高浓度的三种浓缩溶液，每种浓度各含3份;然后用色谱法甲醇制备相同浓度的标准溶液，每个浓度为3份;注射分析，计算出三组样品的峰面积，根据式3.7和3.7的结果计算的方法的ER和AR进行比较和用于这两种方法之间的差异进行分析。果列于表4中可以看出，回收率不纯化> Mycosep226回收率纯化，表明本研究建立的方法具有较高的回收率和一个降低损失率。11个大量木材样品在药店收集苦琼脂，药物在市场上的样品的样品和在广州医院判定结果，每个含2.0g根据制备和分析上述方法。论的基体效应是由于在目标化合物的电离效率样品顺流分量的影响，并且是主要影响因素导致LC-MS / MS定量的不精确性[12]。此，基质效应的评估在该方法的验证阶段尤为重要。主要方法是降低基体效应[12]：优化样品前处理技术，例如不同的纯化柱，稀释样品的纯化，减少干扰组分的浓度，优化溶剂提取，定容溶剂，提高质谱对目标的响应，改善色谱分离，降低并流成分的影响等方法。而，中国报道的中草药中霉菌毒素的LC-MS / MS检测主要集中在样品预处理技术上，即样品通过柱d纯化免疫亲和或多功能纯化柱。检测成本严重限制了LC-MS / MS方法的广泛应用。
此，基于降低基体效应的上述方法中，不同的流动相进行比较，并通过稀释法（0.1％甲酸水溶液的甲醇溶液进行了优化， 4.0mmol·L-1的0.1％甲酸水溶液和甲醇，4.0mmol）。酸铵·L-1 - 0.2％甲酸和甲醇），梯度洗脱，在恒定的体积（流动相，甲醇）等条件下，溶剂水溶液从而增加了响应黄曲霉毒素。后，被用来研究在低浓度，中和élevées.Les矩阵木苦琼脂的效果的实验结果表明，采矿后账单[11]的方法，这项研究的方法克服了LC-MS / MS整体的基质效应和定量分析。过程的影响可用于快速准确地检测苦瓜木材中的AFB1，B2，G1，G2。时，比较该方法与纯化塔Mycosep226的效果，人们发现，AR的速率和ER两者方法是显著不同：纯化后的各黄曲霉毒素的回收率Mycosep226纯化柱减少到一定程度，表明纯化柱纯化。方法导致目标化合物的损失，这对痕量残留黄曲霉毒素的检测极为不利。方法具有上述缺点和提取和检测过程是简单的，这不仅降低了成本检测，而且还提高了结果的精度，并且可以被用于木材的大规模筛查苦瓜。集三种类型苦菜和agariques的在该实验：苦木琼脂（直到外皮），桂花树油炸苦（种皮），木苦琼脂（未接种的），测试结果表明，3个部分的皮肤无核两种污染黄曲霉毒素和其他桂花树苦了未接种不被污染，这或许可以解释的营养成分（油，淀粉种子仁在苦杏仁后完全暴露，对真菌更敏感。染，从而增加黄曲霉毒素污染的风险。此，我们必须认真对待污染现象桂花树苦黄曲霉素，这是需要研究的方法和适当的贮存条件，以减少污染的风险，同时迅速建立标准适当限制有助于减少黄曲霉毒素。消费者来说太糟糕了。项研究提供了快速检测中国中药材中黄曲霉毒素的一个新的研究思路：通过降低基质成分的浓度，优化色谱条件与质谱和减少CO洗脱破坏性成分，有可能摆脱LC-MS / MS的中草药基质。以在不需要昂贵的纯化柱的情况下实现测试的影响，以允许筛选和测试药物。
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